Préparation des ARNs

Méthode d'extraction

La méthode la plus couramment utilisée sur la plateforme est la méthode au trizol pour l'extraction des ARNs totaux. Pour toutes les puces d'expression les ARNs doivent avoir été purifiés sur colonne avant leur envoi (RNeasy clean up kit, Qiagen). Pour les lames miRNAs ne pas réaliser de purification.

Identification

Les ARNs sont identifiés par leur propriétaire. Ces identifications sont reportées sur la fiche de renseignements des demandes d'hybridation qui permet d'enregistrer les informations relatives aux échantillons.

Quantité d'ARNs à fournir

ARN Total :

Quantité optimale : 10.0 µg à une concentration = 250 ng/ µl (dans un volume minimum de 2µl)

Quantité minimale : nous contacter

miRNA :

Quantité optimale : 25.0 µg ARN totaux

Quantité minimale : nous contacter

Qualité des ARNs fournis

DO260/DO280 >=1,8

Absence de signe de dégradation sur gel d'agarose ou sur un profil du Bioanalyzer d'Agilent (ratio 28S/18S>= 1,6 et RIN>5.7)

Envoi des ARNs

En solution dans de l'eau RNAse free sur de la carboglace

Les tubes doivent être bien clairement identifiés et accompagnés de la fiche de renseignements des demandes d'hybridation.